一.产品简介

过氧化氢(H2O2)超快检测试剂盒利用(yòng)H2O2与显色底物(wù)之间的反应，生成红色氧化产物(wù)，通过比色法或荧光法检测样品中的H2O2，反应在10 s内即可(kě)完成，检测限為(wèi)0.02 μM，可(kě)实现H2O2的超快灵敏检测。

二.试剂盒组成与存储

本试剂盒采用(yòng)4 ⁰C运输，收货后请储存在-20 ⁰C。

三.实验步骤
1.溶液配制
增敏剂溶液：将1 mg增敏剂溶解在1 mL缓冲液中，得到增敏剂溶液。
（注：增敏剂溶解后请按每管50 μL或100 μL分(fēn)装保存至-20℃，避免反复冻融）
50 μM H2O2标准液：取10 μL H2O2母液(10 mM)，加入至1.99 mL缓冲液并混匀，该标准液可(kě)在4 ℃長(cháng)期储存。
检测液（以配制1 mL為(wèi)例）：取1 mL缓冲液，加入10 μL 显色液和50 μL 增敏剂溶液。（注：1 mL检测液可(kě)检测20次，但标准曲線(xiàn)绘制需消耗6次，请合理(lǐ)计算检测液配制量。检测液配制后，可(kě)在4℃避光保存24h，使用(yòng)时避免强光照射）。
2.分(fēn)别取0、2.5、5、10、20、40 μL的50 μM H2O2标准液加入至96孔板中，并加入缓冲液补足至50 μL，得到浓度依次為(wèi)0、2.5、5、10、20、40 μM的H2O2溶液。取50 μL待测样品溶液，加入至另外的空白孔中。
3.向每个孔分(fēn)别加入50 μL检测液，避光反应至少10s，通过酶标仪测定570 nm处吸光度，建立标准曲線(xiàn)，根据标准曲線(xiàn)计算样品溶液中H2O2浓度。

四.注意事项
显色液对光敏感，请注意避光保存和使用(yòng)，使用(yòng)过程中避免長(cháng)时间强光照射；
检测液须现配现用(yòng)，若略微变红，仍可(kě)正常使用(yòng)；若颜色明显变红，建议重配；
若检测过程中发现检测溶液先快速变红，后又(yòu)褪色，说明待测样品溶液中H2O2浓度过高，使得显色底物(wù)氧化漂白。当待测样品溶液中H2O2浓度已经超过检测范围时，应将样品溶液稀释后再进行测定。
若检测溶液中存在H2O2之外的其他(tā)强氧化物(wù)质时，可(kě)能(néng)会导致假阳性。因此，建议增加不含H2O2的样品溶液作為(wèi)对照。
向样品溶液中加入检测液10s内，溶液发生明显的显色反应，10s后即可(kě)检测出样品中的H2O2。随时间延長(cháng)，显色底物(wù)会被水中的溶解氧缓慢氧化，長(cháng)时间放置(约12小(xiǎo)时)，溶液颜色也会缓慢加深。因此，向样品溶液中加入检测液后应及时检测。
当样品溶液中H2O2浓度极低时，本试剂盒还可(kě)以通过荧光法检测H2O2，最低可(kě)检测0.02 μM的H2O2。具體(tǐ)步骤如下：
1）取5 μL的50 μM H2O2标准液，加入495 μL缓冲液，配制成0.5 μM H2O2标准液。
2）分(fēn)别取0、2.5、5、10、20、40 μL的0.5 μM H2O2标准液加入至96孔板中，并加入缓冲液补足至50 μL，配制浓度分(fēn)别為(wèi)0、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4 μM的H2O2标准溶液。取50 μL待测样品溶液，加入至另外的空白孔中。
3）向每个孔分(fēn)别加入50 μL检测液，避光反应至少10s，采用(yòng)酶标仪测定激发波長(cháng)為(wèi)540 nm，发射波長(cháng)為(wèi)590 nm处的荧光值，建立标准曲線(xiàn)，根据标准曲線(xiàn)计算样品溶液中H2O2浓度。